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细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)适用于培养细胞的荧光自噬染色观察，又可用FACS检测细胞自噬发生的比例，可与EB合用双染。

自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞噬物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物、损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。自噬是一种进化上保守的降解过程，通过溶酶体途径将长寿命蛋白、细胞器及其他细胞质等组分进行降解，自噬通路的激活对多种细胞功能都是必需的，包括饥饿状态下的存活、细胞内组分清除、发育及免疫等过程。

丹酰尸胺(Dansylcadaverine，MDC)，是一种嗜酸性的荧光色素，通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长355~380nmnm，阻断滤光片波长512～530nm。

• 低速离心机、1.5mL离心管、载玻片、盖玻片、96孔板、荧光显微镜、流式细胞仪
  
• 培养液、蒸馏水、磷酸盐缓冲液

• MDC Stain和EB对人体有一定害处，请小心操作。
  
• 收集细胞前可在培养液中加入不同浓度的药物培养一定时间，诱导细胞自噬。
  
• 操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
  
• Wash Buffer可用PBS代替。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• 玻片法
  
  • 收集细胞，用300～500μL的Wash Buffer清洗细胞1次，800～1000rpm离心，弃上清，加入适量的Stain Buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至10⁶/mL。
    
  • 取90μL细胞悬液至新的1.5mL离心管中，加入10μL的10×MDC Stain，轻轻混匀。
    
  • 37℃或室温避光染色。
    
  • 800～1000rpm离心，弃上清，收集细胞，用300～500μL的Wash Buffer清洗细胞2次，800～1000rpm离心，弃上清。
    
  • 加入100μL的Wash Buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。
    
  • 荧光显微镜观察计数并拍照，也可用流式细胞仪检测药物干预组MDC阳性细胞百分比。
• 96孔板法
  
  • 轻轻吸除96孔板中的培养液，各孔加入10μL 10×MDC Stain和90μL的Stain Buffer，37℃、5% CO₂条件下避光孵育。
    
  • 各孔加入100μL Wash Buffer清洗2～3次，荧光显微镜或流式细胞仪检测观察。
• MDC与EB双染法
  
  • 收集细胞，用300～500μL的Wash Buffer清洗细胞1次，800～1000rpm离心，弃上清，加入适量的Stain Buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至10⁶/mL。
    
  • 取90μL细胞悬液至新的1.5mL离心管中，加入10μL 10×MDC Stain和0.2μM EB染色液，轻轻混匀，滴加于载玻片上，室温避光染色，加盖玻片。
    
  • 荧光显微镜或流式细胞仪检测观察。